органический растворитель
ФБР
A:link { COLOR: #339966; TEXT-DECORATION:none }
A:visited { COLOR: #339966; TEXT-DECORATION:none }
A:active { COLOR: #336633; TEXT-DECORATION:none }
A:hover { COLOR: #336633; TEXT-DECORATION:none }
КАФЕДРА
ФИЗИОЛОГИИ РАСТЕНИЙ
Яшков
М.Ю., Умпелев В.Л. Методические указания к лабораторным работам по курсу биохимии.
РАБОТА
№1. ИССЛЕДОВАНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ
РАСТИТЕЛЬНОГО МАТЕРИАЛА МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ
Метод
хроматографии на бумаге используется для разделения смесей разнообразных
органических веществ. Разделение веществ происходит вследствие различия
в распределении их между двумя жидкими фазами, одна из которых подвижна,
а другая – нет. Неподвижная фаза – вода - удерживается твердым носителем
(в данном случае бумагой), не вступая с ним во взаимодействие. Нанесенные
на бумагу вещества переходят в подвижную фазу (органический растворитель),
и перемещаясь с различными скоростями по бумажным капиллярам, разделяются.
Скорость передвижения влияет на показатель Rf, представляющий отношение
величины смещения зоны вещества (X) к смещению фронта растворителя (Xf)
(рис.1). Для однотипных веществ при постоянных условиях величина Rf является
ориентиром, позволяющим их идентифицировать. Чем больше различие в величинах
Rf разделяемых веществ, тем лучше их разделение.
Rf=X/Xf
Рис.1.
Определение Rf вещества. 1 – расположение вещества на хроматограмме.
Оборудование
и реактивы: спирт этиловый 70%, смесь растворителей (бутанол
: уксусная кислота : вода), р-ры аминокис-лот-метчиков (ала, лей, глу, вал,
гли, сер), сухой растительный материал для экстракции, 1% HCl, водяная баня,
фарфоровые чашки (средние органический растворитель маленькие), хроматографические камеры, хроматографическая
бумага, фильтровальная бумага, микорпипетки, пипетки, колбы на 50 мл, воронки
средние, фильтры, цилиндры мерные, стеклянные палочки, препаровальные иглы
с кусочками резины, линейки, весы технические, стаканчики на 50 мл, штативы,
пинцеты, иголки швейные, нитки, стаканы с решеткой.
Ход
работы:
Экстракция: 0.5 г растительного материала помещают
в колбу на 50 мл, заливают 10 мл 70% этилового спирта органический растворитель ставят на водяную
баню, разогретую до 70-80
градусов C,
на 5 мин. Полученную вытяжку фильтруют через бумажный фильтр в выпарительную
чашку, при этом следует стремиться, чтобы частички материала на фильтр не
попадали, поскольку далее этот материал аналогичным способом экстрагируют
еще дважды. При фильтровании после последней экстракции на фильтр можно
перенести все содержимое колбы. Выпарительную чашку помещают на кипящую
водяную баню органический растворитель выпаривают спирт досуха. Хроматография
Лист хроматографической бумаги размером 24*31 см кладут на рабочее
место, подложив снизу лист чистой бумаги. Отступив 2 см от края узкой стороны,
проводят простым карандашом линию старта. Затем линию старта размечают короткими
штрихами: отступив 1.5 см от края, делают первую отметку, следующую через
2.5 см, затем через 2 см органический растворитель так далее, чередуя отрезки 2.5 органический растворитель 2 см. Всего
2.5 отрезков должно быть пять. На три отрезка в 2.5 см будем наносить растворы
известных аминокислот, так называемых «свидетелей». На каждый из отрезков
- по две аминокислоты: 1 - глу, ала; 2 - вал, гли; 3 - сер, лей. Аминокислоты
предварительно попарно растворяют на часовом стекле. Для этого на соответствующее
часовое стекло берем по 3-6 мг каждой аминокислоты (несколько кристаллов
на кончике стеклянной палочки) органический растворитель приливаем 1 мл 1% HСl. Перемешивают до
растворения. На два отрезка линии старта наносим полученный экстракт. Сухой
остаток в выпарительной чашке растворяют в 0.6 мл 1% HCl, тщательно соскабливая
его со стенок кусочком резинки, наколотым на препаровальную иглу. Подготовив
исследуемый раствор органический растворитель свидетели, приступаем к нанесению. Несколько выше
линии старта под хроматограмму подкладывают линейку или пипетку, добиваясь
чтобы линия старта не касалась подложки. Для нанесения используем стандартные
микропипетки на 0.1 или 0.2 мл. Все свидетели наносим в количестве 0.01
мл, пробу - 0.01 органический растворитель 0.02 мл. Набираем в микропипетку необходимый раствор
в нужном объеме органический растворитель приведя ее в соприкосновение с началом соответствующего
2.5 см участка, аккуратно ведем ее до конца. Скорость движения пипетки должна
быть такой, чтобы весь объем раствора распределился в 2.5 см интервале в
виде ровной полосы. После подсыхания линии старта хроматограмму сшивают
в форме цилиндра. Для этого необходимо, соединив края «в стык», сшить их
в 3-4 местах. Не следует накладывать края друг на друга: в утолщении скорость
движения растворителя увеличивается, органический растворитель качество разделения на крайних участках
ухудшается. Для хроматографии используется камера из двух цилиндрических
сосудов. На дно нижнего сосуда наливается 40-45 мл смеси: трет-бутанол :
муравьиная кислота : вода в соотношении 75:12:13. При приготовлении растворителя
все компоненты должны быть хорошо перемешаны. Хроматограмму ставят в растворитель
и закрывают верхним цилиндром. Необходимо проследить, чтобы хроматограмма
нигде не касалась стенок камеры. Время разделения - 15 - 20 часов. При достижении
фронтом растворителя верхнего края хроматограммы, ее вынимают органический растворитель сушат в
сушильном шкафу.
ПРОЯВЛЕНИЕ
ХРОМАТОГРАММЫ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ АМИНОКИСЛОТ
Оборудование
и реактивы: р-р нингидрина, фарфоровая чашка, стеклянные трубки
с ватой, ножницы, линейки, таблицы со значениями Rf.
Ход
работы: Высушенную хроматограмму проявляют раствором нингидрина,
равномерно смачивая этим раствором ее поверхность. Для этого используется
кисточка из ваты или пульверизатор. При проявлении нельзя класть хроматограмму
на стол, она должна находиться «на весу». Нельзя браться за смоченную поверхность
руками, остаются отпечатки пальцев. Пропитанную хроматограмму помещают в
сушильный шкаф на 15 мин при 70
градусах C.
Аминокислоты обнаруживаются в виде сине-фиолетовых пятен. Пролин образует
с нингидрином соединение желтого цвета. Идентификацию аминокислот проводят
по совпадению на хроматограмме положения аминокислот пробы органический растворитель аминокислот-свидетелей.
Аминокислоты, располагающиеся на одном уровне, являются идентичными. В разделенных
парах свидетелей ближними к старту будут глу, гли, сер. Определение аминокислот
можно осуществить органический растворитель по значению Rf. Для этого измеряют с точностью до миллиметра
расстояние от линии старта до линии фронта растворителя (в данной работе
это как правило верхний край хроматограммы). С такой же точностью измеряют
расстояние от старта до центра цветового пятна идентифицируемой аминокислоты.
Отношение последнего расстояния к первому дает значение Rf для данной аминокислоты
в данном растворителе. В справочной литературе содержатся сведения по коэффициентам
Rf для многих веществ, разделяемых в различных системах растворителей. В
настоящей работе, кроме идентификации аминокислот пробы по свидетелям необходимо
определить в пробе три аминокислоты, для которых свидетели не наносились,
по Rf. Значения Rf имеются в Справочнике по биохимии, с.912.
РАБОТА
№2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА
Фосфор
в виде аниона РО43- содержится в значительном количестве
в тканях растений органический растворитель животных. Он входит в состав нуклеиновых кислот, АТФ,
коферментов НАД, НАДФ органический растворитель ФАД. Задачей работы является определение количества
фосфора, поглощенного из среды культурой хлореллы в процессе ее выращивания.
Для этого анализируется исходная среда Тамии органический растворитель среда из-под хлореллы. По
разнице определений вычисляют количество фосфора, усвоенного водорослью
за период культивирования. В основе метода определения фосфора лежит реакция
этого элемента с молибдатом аммония в кислой среде. В результате взаимодействия
с восстановителем образуется соединение, окрашенное в синий цвет – «молибденовая
синь». Плотность развившейся окраски пропорциональна содержанию фосфора
в растворе. При подготовке к анализу исходную среду Тамии разбавляют в 20
раз. Суспензию хлореллы освобождают от клеток путем центрифугирования; супернатант
разбавляют в 5-10 раз.
Оборудование
и реактивы: р-р молибдата аммония в серной кислоте, р-р аскорбиновой
кислоты, центрифуга, центрифужные пробирки, пробирки, пипетки, водяная баня,
фотоэлектрокалориметр, фотокюветы.
Ход
работы:
1. Для построения калибровочной кривой графика готовят серию стандартных
растворов из исходного раствора, содержащего 0.04 мг Р2О5
в 1 мл. В четыре пробирки вносят последовательно 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 мл исходного
стандарта. Содержимое трех первых пробирок доводят водой до 2 мл .
2. В пятую пробирку приливают 2 мл среды Таммии (разбавленной в 20 раз),
в шестую пробирку – 2 мл супернатанта из-под хлореллы (после разбавления
в 5-10 раз).
3. Во все пробирки добавляют по 1 мл раствора молибдата аммония в серной
кислоте органический растворитель по 5 мл раствора аскорбиновой кислоты. ТЩАТЕЛЬНО ПЕРЕМЕШИВАЮТ.
4. Все пробирки одновременно помещают в кипящую водяную баню на 8 минут.
5. После остывания растворы колориметрируют на ФЭКе в 5 мм кюветах при красном
светофильтре.
6. Для расчетов необходимо построить в тетради (лучше на миллиметровке)
калибровочный график. Результат анализа должен быть представлен в виде количества
Р2О5 в мг, поглощенного хлореллой
из 1 л среды. При расчете следует помнить о проведенных разбавлениях анализируемых
сред.
РАБОТА
№3. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ФЕРМЕНТОВ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
АМИЛАЗНОЙ АКТИВНОСТИ СЛЮНЫ
Амилазную
активность слюны выражают в количестве субстрата (крахмала), расщепляемого
1 мл слюны за определенный промежуток времени (30 мин). Определение основано
на нахождении максимального разведения, при котором слюна еще расщепляет
крахмал полностью за взятый промежуток времени. О наличии или отсутствии
крахмала в растворе судят по йодной реакции.
Оборудование
и реактивы: р-р I+KI, 0.1%-ный р-р крахмала,
пробирки, штативы, пипетки, стаканчики на 50 мл, фарфоровые чашечки, водяные
бани, стаканы, электроплитки, термометры.
Ход
работы:
1. Наливают в 8 пронумерованных пробирок по 1 мл дистиллированной воды.
2. В первую пробирку отливают 1 мл слюны, разведенной водой в 10 раз. Для
получения слюны, разведенной в 10 раз, необходимо 20 мл воды подержать во
рту 2 минуты.
3. Перемешивают содержимое первой пробирки путем втягивания пипеткой жидкости
из пробирки органический растворитель последующего выпускания из пипетки.
4. Переносят 1 мл из первой пробирки во вторую.
5. Перемешивают содержимое второй пробирки, переносят 1 мл из второй пробирки
в третью органический растворитель т.д. до восьмой пробирки. Из восьмой пробирки 1 мл жидкости выливают.
Таким образом получают ряд разведений.
6. Наливают во все 8 пробирок по 1 мл дистиллированной воды.
7. Наливают во все пробирки, начиная с восьмой, по 2 мл 0,1% - ного раствора
крахмала органический растворитель перемешивают содержимое каждой пробирки.
8. Одновременно помещают все 8 пробирок в нагретую до 37 градусов
C водяную баню.
9. Через 30 мин пробирки вынимают органический растворитель охлаждают током холодной воды. В штатив
ставят по порядку номеров.
10. Приливают в каждую пробирку по 2 капли йода. Желтый цвет в пробирках
свидетельствует об отсутствии крахмала, красно-бурый – о присутствии промежуточных
продуктов расщепления, синий – о наличии крахмала.
11. Вычисляют амилазную активность исследуемой слюны; достаточное расщепление
крахмала имеет место в той пробирке, где нет синего оттенка Для примера,
пусть это будет 5-я пробирка. В 5-й пробирке неразведенной слюны было 1/320
мл, т.е. можно записать: 1/320 мл слюны расщепляет 2 мл 0.1%-ного раствора
крахмала. 1 мл слюны расщепляет x мл 0.1%-ного раствора крахмала. Х= 2 /
(1/320) = 640 Следовательно, 1 мл неразбавленной слюны за 30 минут при 37
градусах С расщепляет 640 мл 0.1%-ного раствора крахмала.
ВЛИЯНИЕ
рН НА ДЕЙСТВИЕ ФЕРМЕНТОВ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ рН ОПТИМУМА ДЕЙСТВИЯ АМИЛАЗЫ
Ферменты
очень чувствительны к изменению кислотности среды, в которой они действуют.
Можно считать, что для каждого фермента имеется определенная концентрация
протонов, при которой он наиболее активен. Изменение кислотности среды в
ту или иную сторону от оптимума рН вызывает понижение активности фермента.
Оборудование
и реактивы: 0.1 М р-р лимонной кислоты,
0.2 М р-р Na2HPO4*2H2O,
30% р-р H2SO4, р-р I+KI, 0.1%
и 1%-ный р-р крахмала, индикаторная бумага универсальная, пробирки, штативы,
пипетки на 2 органический растворитель 5 мл, стаканчики на 50 мл, цилиндры на 25 органический растворитель 50 мл, фарфоровые
чашечки, водяные бани, стаканы, электроплитки, термометры.
Ход
работы:
1. В стаканчиках на 50 мл готовят буферные растворы в соответствии с данными
таблицы. Определяют рН растворов с помощью индикаторной бумаги.
2. Берут 5 пробирок, в каждую приливают по 2 мл буферных растворов, 2 мл
1%-ного раствора крахмала, 2 мл слюны, разведенной в 20 раз.
3.Содержимое каждой пробирки перемешивают органический растворитель оставляют стоять на 10-15 мин.
Время ориентировочное. Необходимо контролировать ход гидролиза через каждые
5 мин. Для этого из пробирки с рН 6.8 берут на фарфоровую чашечку 1 каплю
жидкости органический растворитель проводят реакцию с йодом. Опыт лучше прекращать при неполном
расщеплении крахмала (красноватая окраска продуктов реакции). Для прекращения
опыта во все пробирки добавляют по 2 капли йода. На основании полученной
в пробирках окраски судят о степени расщепления крахмала в зависимости от
рН. Там, где крахмал расщепляется наиболее полно, было оптимальное значение
рН для действия амилазы.
Фосфатно-цитратная
буферная система
Объем,
мл
0,1
М лимонная кислота
12,29
7,91
4,55
1,83
0,55
0,2
М Na2HPO4*2H2O
7,71
12,09
15,45
18,17
19,45
pH
4,0
5,8
6,8
7,4
8,0
ВЛИЯНИЕ
ТЕМПЕРАТУРЫ НА АКТИВНОСТЬ АМИЛАЗЫ СЛЮНЫ
При низкой температуре ферментативные реакции идут медленно. По мере повышения
температуры скорость ферментативных реакций обычно повышается. По достижении
некоторого оптимума повышение температуры уже ведет к падению активности
фермента органический растворитель вследствие этого к снижению скорости ферментативных реакций.
Так уже при температуре раствора 50-60 градусов
C часто происходит температурная
инактивация ферментов. Для огромного большинства ферментов температурный
оптимум лежит в пределах 30-40
градусов C. В зависимости от состояния,
в котором находится фермент, температурная устойчивость его не одинакова.
Сухие препараты некоторых ферментов выдерживают нагревание даже до 1000С
без заметной потери своей активности. В растворе же эти ферменты при 100
градусах
C целиком теряют свою каталитическую
активность. Низкая температура не инактивирует ферменты. Как правило, она
лишь замедляет или останавливает их действие. В отличие от ферментных, реакции
с неорганическими катализаторами ускоряются с повышением температуры.
Оборудование
и реактивы: 30% р-р H2SO4,
р-р I+KI, 1%-ный р-р крахмала, пробирки, штативы, пипетки на 2 органический растворитель 5 мл, стаканчики
на 50 мл, цилиндры на 25 органический растворитель 50 мл, фарфоровые чашечки, водяные бани, стаканы,
электроплитки, термометры.
Ход
работы:
1. Наливают в 5 пробирок по 2 мл 1%-ного раствора крахмала органический растворитель помещают в
различные температурные условия: - в холодную воду, - оставляют при комнатной
температуре, - в водяную баню при 37 градусах С - в водяную баню при 70
градусах C- в водяную баню при 100
градусах C
2. После того, как температура в пробирках уравняется с температурой окружающей
среды (примерно через 3 минуты) добавляют в каждую пробирку по 1 мл разбавленной
в 20 раз слюны. Перемешивают содержимое пробирок органический растворитель оставляют их на 20 минут
(время ориентировочное). Необходимо контролировать ход гидролиза через каждые
5 минут. Для этого, из пробирки, находящейся при температуре 37 градусов
C, берут на фарфоровую чашечку одну
каплю жидкости органический растворитель проводят реакцию на крахмал с йодом. Опыт лучше прекращать
при неполном гидролизе крахмала в этой пробирке (бурая или красноватая окраска
продуктов реакции). Для прекращения опыта во все пробирки добавляют 2 капли
йода.
3. Одновременно проводят опыт с кислотным гидролизом крахмала. Берут 5 пробирок,
вносят 2 мл 1%-ного раствора крахмала органический растворитель помещают в те же температурные условия,
что органический растворитель в первом случае. Добавляют в каждую пробирку по 2 мл 30%-ного раствора
серной кислоты, перемешивают органический растворитель оставляют на 20 минут. По прошествии 20 минут
в пробирки добавляют по 2 капли раствора йода. Отмечают визуально особенности
гидролиза крахмала под действием амилазы слюны органический растворитель сравнивают с кислотным
гидролизом.
РАБОТА
№4. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ АМИНОКИСЛОТ
Аминокислоты в растворе находятся в виде ионов. Их заряд, определяемый степенью
диссоциации карбоксильных, аминогрупп органический растворитель боковых радикалов, зависит от рН
раствора. Используя метод электрофореза на бумаге, удается провести разделение
определенных групп аминокислот. Сложные смеси аминокислот могут быть разделены
с помощью электрофорезов, проводимых при разных значениях рН во взаимоперпендикулярных
направлениях.
Оборудование
и реактивы: борно-боратный буфер, рН=8.6, р-ры аминокислот (лиз
и глу), р-р нингидрина, прибор для электрофореза, блок питания, полоски
хроматографической бумаги 3*38 см, бумага хроматографическая для мостков
в камере, кисточки из ваты, пинцет, фарфоровая чашка.
Ход
работы:
1. Электрофоретическую ванну устанавливают горизонтально, органический растворитель в кюветы ванны
заливают буферный раствор. Необходимо добиться одинакового уровня раствора
в кюветах.
2. Между анодной органический растворитель катодной кюветами натягивают полосы фильтровальной бумаги,
предварительно смоченные буферным раствором. Каждая бригада устанавливает
одну полоску.
3. Для анализа используется смесь двух аминокислот: лизина органический растворитель аспарагиновой
кислоты. Раствором аминокислот пропитывают маленькие кусочки фильтровальной
бумаги размером 5*20 мм органический растворитель осторожно, пинцетом, размещают их в средней части
на поверхности натянутых в ванне полос, ориентируя в поперечном направлении.
4. Далее вставляют в кюветы электроды, закрывают крышку ванны органический растворитель включают
выпрямитель. Устанавливают напряжение исходя из требуемого тока 2 мА на
полоску. Электрофорез продолжается 15-20 мин, после чего отключают ток,
достают электрофореграммы органический растворитель помещают их в сушильный шкаф. Высушенные электрофореграммы
проявляют нингидрином. В отчете по работе необходимо схематически изобразить
прибор для электрофореза органический растворитель отметить положение аминокислот на электрофореграмме,
объяснить направление движения аминокислот.
РАБОТА
№5. ГЕЛЬ-ХРОМАТОГРАФИЯ. РАЗДЕЛЕНИЕ СМЕСИ КРАХМАЛА И ГЛЮКОЗЫ
Гель-проникающая, или молекулярно-ситовая, хроматография является методом
разделения, очистки органический растворитель анализа органических соединений. Разделение основано
на различии в размерах молекул компонентов анализируемых смесей. С помощью
этого метода можно также определять молекулярную массу высокомолекулярных
соединений. Гели, используемые в качестве молекулярных сит, - это сшитые
полимеры, которые в общем инертны, не связываются органический растворитель не реагируют с анализируемыми
веществами органический растворитель не имеют заряда. Широкое распространение получили гели на основе
декстрана, агарозы органический растворитель полиакриламида. К декстрановым гелям относятся продукты
под торговым названием «сефадексы», выпускаемые шведской фирмой «Farmacia».
Исходным материалом для производства сефадексов является полисахарид, образующийся
при выращивании бактерии Leuconostoc mesenteroides на среде с сахарозой.
Этот полимер построен исключительно из остатков глюкозы органический растворитель содержит 90% *-1,6-гликозидных
связей. При обработке декстрана эпихлоргидрином происходит соединение пар
гидроксилов различных цепей остатками глицерина.
Рис.2
Фрагмент структуры геля сефадекса
Сефадексы
выпускаются в продажу в виде гранул определенных размеров. Существует 8
марок сефадексов, различающихся количеством введенных в матрицу глицериновых
сшивок; чем больше последних, тем меньше размер пор в гранулах, тем меньше
свободных гидроксильных групп, тем меньше набухаемость геля.
Рис.3.
Разделение веществ на колонке с сефадексом
Процесс
разделения веществ на колонке, заполненной гранулами сефадекса, схематически
представлен на рис.3, причем здесь для большей наглядности изображены молекулы
лишь двух типов (крупные органический растворитель мелкие точки) органический растворитель гранулы геля (кружки). На рис.3А
показан вид колонки с гелем непосредственно после нанесения на нее смеси.
При промывании колонки растворителем начинается движение веществ. Гель не
препятствует диффузии небольших молекул. Они проникают в гранулы геля, на
какое-то время задерживаются там, тогда как более крупные молекулы, будучи
не в состоянии диффундировать внутрь гранул, движутся только в окружающем
их слое растворителя (внешнем объеме), рис.3Б. В результате, при продолжающейся
подаче растворителя крупные молекулы перемещаются по колонке с большей скоростью,
чем мелкие (рис.3В), движение которых постоянно тормозится диффузией в неподвижную
фазу (гель). В конечном итоге компоненты смеси элюируются с колонки, наполненной
сефадексом, в порядке уменьшения их молекулярной массы, т.е. в соответствии
со степенью торможения их неподвижной фазой геля, вызванной диффузией в
гранулы геля.
Оборудование
и реактивы:
Колонка, заполненная сефадексом G25, с резервуаром для элюирующего раствора;
коллектор фракций или 2 штатива с 30 пробирками; стакан на 50 мл; элюирующий
раствор NaСl (0.5%); смесь для анализа: крахмал (1%), глюкоза (1.5%), NaСl
(0.5%); реактив Люголя; реактив Феллинга.
Ход
работы:
Для разделения крахмала органический растворитель глюкозы используют колонку, заполненную гелем
сефадекса G25. Убедившись в перекрытии тока раствора из резервуара с элюирующей
жидкостью, вынимают пробку из верхнего конца колонки. На поверхность геля
шприцем наслаивают около 2 мл смеси крахмала органический растворитель глюкозы. Иглу шприца по возможности
ближе подносят к границе геля, после чего начинают медленно нажимать на
поршень шприца. Необходимо следить, с одной стороны, за тем, чтобы не повредить
поверхность геля, органический растворитель с другой,- чтобы наносимый белок не смешивался со всей
массой раствора над гелем. Наслаиваемый объем должен распределяться тонким
слоем на поверхности геля. "Загрязнение" наносимой смесью значительной массы
элюирующего раствора ухудшает качество разделения. Колонку закрывают органический растворитель подают
в качестве элюирующего раствора раствор NaCl. Снимают эажим на выходе колонки
и начинают собирать элюат в пробирки - в каждую по 3 мл. (Пробирки предварительно
калибруют на 3 мл). Необходимое количество пробирок зависит от емкости используемой
колонки. Для колонки, содержащей около 60 мл геля, требуется от 15 до 18
пробирок. Заполнив указанное количество пробирок, колонку закрывают, органический растворитель в
собранных порциях элюата проводят определение глюкозы органический растворитель крахмала. Для качественной
реакции на крахмал из пробирок отбирают по 1,5 мл раствора в другие пробирки
и прибавляют 2-3 капли реактива Люголя (I + KI). Глюкозу обнаруживают по
реакции с реактивом Феллинга. К оставшейся порции элюата добавляют 2 мл
Феллинговой жидкости органический растворитель нагревают на спиртовке до закипания. В пламени спиртовки
должен находиться верхний слой раствора. КИПЯТЯТ ОСТОРОЖНО! При нагревании
дна пробирки возможно моментальное вскипание органический растворитель выброс содержимого наружу.
В итоге, в пробирках с глюкозой выпадает красный осадок закиси меди. При
оформлении работы следует описать, руководствуясь глазомерной оценкой, распределение
по пробиркам крахмала органический растворитель глюкозы.
РАБОТА
№6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЗОТА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ
ОЗОЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА МЕТОДОМ МОКРОГО СЖИГАНИЯ
Сущность
метода состоит в озолении органического материала при нагревании с концентрированной
H2SO4 в присутствии различных
добавок; это могут быть любые окислители: HClO4конц
или Н2О2, либо вещества, выполняющие
каталитическую функцию,- селен, соли ртути, сернокислая медь органический растворитель ряд других.
Как правило, сжигание проводят в специально предназначенных для этого узкогорлых
круглодонных колбах Кьельдаля. При нагревании под действием H2SO4
вся органика разлагается до Н2О, СО2
и NH4+. Ион аммония в кислой среде удерживается в
растворе. Переходят в минеральную форму органический растворитель все другие элементы озоляемого
материала. В результате в подготовленном таким образом материале можно проводить
определение общего азота, фосфора, калия органический растворитель многих других минеральных элементов.
Оборудование органический растворитель реактивы: измельченный
сухой растительный материал, торсионные весы до 500 мг, колбы Къельдаля,
колбы мерные на 100 мл, колбы обыкновенные на 100 мл с пробками, пипетки
на 10 мл с поршнями, ящик для колб Къельдаля, нагреватели для колб Къельдаля,
смесь конц. H2SO4 органический растворитель 60% HClO4
в соотношении 10:1.
Ход
работы: Взвешивают на торсионных весах 200 мг сухого растительного
материала органический растворитель помещают его в колбу Кьельдаля на 100 мл. Для предотвращения
попадания частичек материала на стенки колбы при засыпке навески в нее вставляют
сухую чистую стеклянную трубку (диаметром меньше горловины колбы, органический растворитель длиной
немного больше ее высоты) или сложенный в трубку лист кальки. Материал заливают
смесью концентрированных H2SO4
и HClO4 (соотношение 10:1) в количестве 5,5 мл органический растворитель ставят
на нагреватель. С появлением белых паров колбу снимают с нагревателя, несколько
раз встряхивают органический растворитель оставляют на 10-15 мин в штативе. Необходимо добиться
полной пропитки кислотой всего объема навески. В случае неполного смачивания
материала при дальнейшем нагревании колбы происходит воспламенение сухих
частичек, что вызывает потери азота. После пропитывания навески кислотой
колбу снова ставят на нагреватель органический растворитель продолжают сжигание до полного обесцвечивания
жидкости в колбе. Обычно процесс занимает 15-20 мин. Колбу с минеральным
содержимым охлаждают до комнатной температуры. Далее медленно, по стенкам
горловины в колбу приливают 20-30 мл воды органический растворитель осторожно перемешивают весь
объем жидкости. Колбу вторично охлаждают, затем ее содержимое переливают
в мерную колбу на 100 мл, споласкивая колбу Къельдаля несколькими порциями
воды по 10-20 мл. Мерную колбу охлаждают органический растворитель доводят водой до метки. После
этого раствор можно перелить в обыкновенную колбу на 100 мл, закрыть органический растворитель хранить
до момента анализа.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ОБЩЕГО АЗОТА С РЕАКТИВОМ НЕССЛЕРА
Колориметрический метод определения аммиачного азота с помощью реактива
Несслера основан на свойстве иона аммония образовывать с солями ртути в
щелочной среде цветной комплекс. Интенсивность окраски комплекса в определенном
интервале пропорциональна количеству азота, находящемуся в растворе.
Оборудование
и реактивы:1% р-р NaOH, реактив Несслера, стандартные растворы с
разным содержанием азота, мерные колбы на 50 мл, фотоэлектрокалориметр,
фотокюветы.
Ход
работы: 1 мл раствора, полученного после мокрого озоления вносят
в мерную колбу на 50 мл. Приливают 7.2 мл 1% NaOH для нейтрализации раствора.
Содержимое колбы доводят до метки, добавляют 1 мл реактива Несслера органический растворитель сразу
переливают в обычную колбу или стакан на 50-100 мл. Через 3 минуты развившуюся
окраску колориметрируют на ФЭКе при длине волны 400 нм в кюветах на 20 мм.
Содержание иона аммония определяют по калибровочному графику, построенному
по растворам с содержанием азота 0.02, 0.04, 0.06, 0.08 мг / мл, которые
готовят из стандартного раствора с содержанием азота 0.1 мг / мл. Далее
1 мл приготовленного раствора вносят в мерную колбу на 50 мл, доводят водой
до метки, приливают 1 мл реактива Несслера органический растворитель переводят раствор в колбу 50-100
мл. Через 3 минуты колориметрируют. Необходимо также провести холостое определение
с реактивом Несслера без внесения азота. Во всех случаях колориметрирование
ведется против воды. Содержание азота в материале выразить в процентах на
сухой вес.
РАБОТА
№7. ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ ВИТАМИНОВ В1 И В2
Световая
энергия, поглощенная веществом, переходит во внутреннюю энергию возбуждения
молекулы. Поглощенная энергия может расходоваться молекулой различными способами:
1) радиационным (излучательным): М** Мо * h* ,где h* - квант излучения (люминесценции),
М*, Мо – молекула в возбужденном органический растворитель основном состояниях соответственно;
2)
безизлучательным: М** Мо * теплота ;
3) расходование энергии электронного возбуждения на фотохимические реакции;
4) миграция энергии возбуждения на
соседние молекулы органический растворитель дальнейшее расходование ее перечисленными выше тремя
способами. Свойство многих биологически важных молекул излучать в видимой
части спектра (флуоресцировать) при освещении их ультрафиолетом используется,
с одной стороны, для качественного органический растворитель количественного анализа тех или иных
веществ, органический растворитель с другой – позволяет по параметрам излучения судить об особенностях
структуры излучающей молекулы, ее изменениях в ходе метаболизма. Объектом
люминесцентного анализа может быть как молекула биополимера, так органический растворитель сложное
надмолекулярное образование – хлоропласт, рибосома, биологическая мембрана,
хроматин органический растворитель т.д.
Оборудование
и реактивы: Облучатель
ультрафиолетовый ( ); ступка с пестиком; пипетка на 10 мл; микропипетка
на 0,1 или 0,2 мл; стакан на 50 мл; штатив с 10 пробирками; поливитаминное
драже с известной концентрацией витаминов В1 органический растворитель В2;
K3Fe(CN)6 (5%); NaOH (10%);
изобутиловый спирт.
Ход
работы. Одно поливитаминное драже измельчают в ступке органический растворитель растворяют
в 50 мл воды. Этот раствор служит для определения витаминов В1
и В2. Витамин В1. Готовят серию
разбавлений анализируемого раствора. Для этого в 5 пробирок последовательно
вносят возрастающие количества раствора от 0,02 до 0,1 мл. Добавляют в каждую
пробирку по 3 мл воды. Поскольку исходная форма витамина В1-тиаминхлорид
не флюоресцирует, ее переводят в флюоресцирующее производное – тиохром путем
окисления феррицианидом калия в щелочной среде: в пробирки добавляют 0,5
мл K3Fe(CN)6 органический растворитель 2 мл 10% раствора
NaOH органический растворитель тщательно встряхивают. Затем приливают по 1 мл изобутилового спирта.
Снова интенсивно взбалтывают в течение 1 минуты. Тиохром переходит из водной
фазы в спиртовую. Наблюдают голубую флюоресценцию изобутилового слоя в УФ
лучах. На основании разницы в интенсивности свечения растворов с соответствующими
концентрациями витамина В1 дают заключение о точности
глазомерной оценки количеств витамина в анализируемых образцах. Витамин
В2 Готовят серию разбавлений исходного раствора по
методике, описанной для витамина. В1. После добавления
во все пробирки по 3 мл воды просматривают флюоресценцию растворов в УФ.
Растворы витамина. В2 в УФ имеют зеленоватое свечение
без каких-либо дополнительных химических модификаций. По аналогии с предыдущей
работой требуется сделать вывод о разрешающей способности глазомерной оценки
содержания витамина. В2 в анализируемых пробах.
РАБОТА
№8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ
Аскорбиновая
кислота может функционировать как промежуточный переносчик водорода при
окислении некоторых органических кислот в процессе дыхания. Окислительно
– восстановительные превращения аскорбиновой кислоты в растениях связаны
с ферментативными превращениями окисленного органический растворитель восстановленного глутатиона.
Содержание этих веществ в растительных тканях служит показателем их восстановительной
и общей физиологической активности. Определение содержания аскорбиновой
кислоты основано на ее способности восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол.
При титровании кислого раствора аскорбиновой кислоты индикатор переходит
из окрашенной формы в бесцветную. Титруют до появления розового цвета, обусловленного
избытком индикатора в среде.
Оборудование
и реактивы: Растительный материал для анализа: картофель, лук,
капуста, яблоко; весы с разновесами; ступка с пестиком; лопаточка или скальпель;
микробюретки на 1 или 2 мл – 2 шт.; колба мерная на 50 мл; пипетка на 10
мл; конические колбы на 50 мл – 6шт.; воронка; фильтры; песок или толченое
стекло; трихлоруксусная кислота (5%); 0,001 н раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола
(краска Тильманса); 0,001 н раствор KIO3; KI (15%);
крахмал (1%); кристаллическая аскорбиновая кислота.
Ход
работы: 2 г растительного материала, растирают в фарфоровой ступке
с 10 мл 5%-ной трихлоруксусной кислоты. Для лучшего измельчения материала
в ступку добавляют немного, но всегда одно органический растворитель то же количество свободного
от железа кварцевого песка или битого стекла Растирание продолжается 3-5
мин до получения однородной массы. Далее содержимое ступки с помощью воронки
переводят в мерную колбу на 50 мл, при этом трихлоруксусной кислотой тщательно
обмываются ступка органический растворитель пестик, органический растворитель доливают колбу до метки этой же кислотой.
Мерную колбу закрывают пробкой органический растворитель в течение 5 мин встряхивают. После этого
содержимое колбы фильтруют в сухую колбу. Для определения содержания аскорбиновой
кислоты берут в 2 конические колбочки по 5 мл фильтрата органический растворитель титруют из микробюретки
раствором 0.001 н 2,6-дихлорфеноиндофенола до слабо-розового окрашивания,
сохраняющегося в течение 20 секунд. Поскольку раствор 2,6-дихлорфеноиндофенола
неустойчив при хранении, его титр рекомендуется сопоставлять с титром свежеприготовленного
из фиксанала 0.001 н раствора KIO3. Для этого кристаллик
аскорбиновой кислоты растворяют в 50 мл 2% H2SO4,
после чего оттитровывают по 5 мл полученного раствора в двукратной повторности
раствором краски органический растворитель раствором йодата калия. Рассчитывают соотношение объемов
(К). При титровании йодатом калия в колбочку необходимо добавить 2-3 капли
15% раствора KI, пять капель 1% раствора крахмала; титровать до слабо-синего
цвета, сохраняющегося в течение 20 секунд. Расчет содержания аскорбиновой
кислоты (А) ведут по следующим формулам:
K=KJO3
(мл) / 2,6-дихлорфенолиндофенол (мл)
А
(мг %) = a*k*0.088*M*100 / m*n
где
а - количество 2,6-дихлорфеноиндофенола, пошедшего на титрование, мл; К
– соотношение объемов; 0,088 – количество восстановленной аскорбиновой кислоты,
мг, эквивалентное 1 мл 0.001 н раствора KIO3; М –
общий объем экстракта, мл; m - объем экстракта, взятого для титрования,
мл. Содержание вещества, выражаемое в мг% соответствует количеству мг этого
вещества в 100 г навески.
РАБОТА
№9. ОБЪЕМНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРАХМАЛА
Метод
основан на растворении крахмала при нагревании в 80%-ном растворе Ca(NO3)2
и осаждении его из полученного раствора йодом. В присутствии KJ органический растворитель Ca(NO3)2
йод полностью осаждает крахмал в виде темно-синего соединения, содержащего
14-16% йода. После центрифугирования органический растворитель промывания осадка крахмал окисляют
бихроматом в присутствии серной кислоты до СО2 органический растворитель Н2О:
4K2Cr2O7
+ (C6H10O5)n
+ 16H2SO4 = 6CO2
+ 4K2SO4 + 4Cr2(SO4)3
+21H2O Избыток бихромата разрушают KJ, в результате
чего выделяется йод, который оттитровывают гипосульфитом. J2
+ 2Na2S2O3
= Na2S4O6
+ 2NaJ
Оборудование
и реактивы: навеска растительного материала, Ca(NO3)2
80%, раствор J2 0,5%, раствор J2
0,01%, 0.5 н раствор K2Cr2O7
в серной кислоте, раствор KJ 20%, раствор Na2S2O3
0,5 н, раствор крахмала 0,5%, колбы, центрифужные пробирки.
Ход
работы: Навеску клубней картофеля 0,5 г растирают в ступке с 5 мл
80%-ного раствора Ca(NO3)2 органический растворитель
переносят в коническую колбу на 100 мл, промывают ступку 10 мл 80% Ca(NO3)2
и выливают раствор в ту же колбу. Колбу закрывают воронкой органический растворитель кипятят при
слабом нагреве 3-5 мин. При этом крахмал переходит в коллоидный раствор.
После кипячения содержимое колбы переводят в центрифужную пробирку, споласкивая
ее 20 мл Н2О. Центрифугируют 2-3 мин при 2000-3000
об / мин. Раствор крахмала сливают в мерную колбу на 50 мл. Осадок в пробирке
дважды промывают 5-10 мл горячей дистиллиро-ванной воды, центрифугируют,
и центрифугат присоединяют к содержимому мерной колбы. Колбу доводят до
метки дистиллированной водой. В чистую центрифужную пробирку наливают 2
мл 0,5% раствора йода органический растворитель вносят из мерной колбы 5 мл раствора крахмала, перемешивают
и оставля-ют на 15 мин для выделения осадка йодкрахмального соединения синего
цвета. После этого центрифугируют, прозрачный раствор сливают, органический растворитель осадок
промывают 5 мл 5% смесью раствора Ca(NO3)2
с 0,01% раствором йода органический растворитель снова центрифугируют. Промытый осадок переносят
в колбу на 100 мл, замывая центрифуж-ную пробирку водой, общий объем которой
не должен превышать 3 мл. В колбу приливают 5 мл 0.5 н раствора бихромата
калия в серной кислоте и, помешивая раствор стеклянной палочкой, погружают
в кипящую воду на 10 мин. После этого колбу охлаждают, прибавляют 60 мл
воды органический растворитель 5 мл 20%-ного раствора KJ. Выделившийся при реакции йод титруют 0.1
н раствором тиосульфата. Титруют до желтой окраски, после чего добавляют
1 мл 0.5% раствора крахмала органический растворитель титруют до слабоголубого цвета. Отдельно титруют
5 мл 0.5 н раствора бихромата калия после предварительного разбавления таким
же количеством воды, как органический растворитель при титровании крахмала. Расчет по формуле:
X=0.675*B*k*(b-a)/V*n
де
Х – содержание крахмала в %, В – общий объем исследуемого рас-твора в мл;
V – объем исследуемого раствора, взятый для осаждения крахмала йодом в мл;
a – объем 0,1 н раствора тиосульфата, затраченный при определе-нии крахмала,
мл; b – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия, затраченный при контрольном
титровании бихромата, мл; К – нормальность раствора тиосульфата, n – навеска
вещества в г; 0,675 – титр крахмала по 0,1 н тиосульфату.
РАБОТА
№10. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕДУЦИРУЮЩИХ И НЕРЕДУЦИРУЮЩИХ САХАРОВ ПО БЕРТРАНУ
Метод основан на способности редуцирующих сахаров, обладающих свободной
карбонильной группой, восстанавливать в щелочном растворе окисную медь в
закисную. Сахароза органический растворитель другие олигосахара, у которых связаны обе карбонильные
группы, требуют предварительного гидролиза кислотой (или ферментом). Задача
заключается в том, чтобы определить количество образовавшегося осадка закиси
меди, которое строго соответствует количеству сахара в растворе. Осадок
закиси меди отделяют органический растворитель окисляют окисным железом, восстанавливая его в закисное,
а последнее в свою очередь также количественно окисляют 0,1 н раствором
перманганата калия. При этом протекают следующие реакции:
CuSO4
+ 2NaOH = Cu(OH)2 + Na2SO4
Cu(OH)2
+ (CHOHCOO)2NaK = Cu(OCHCOO)2NaK
+ 2H2O
2Cu(OCHCOO)2NaK
+ RCOH = Cu2O + 2(CHOHCOO)2NaK
+ RCOOH Cu2O + Fe2(SO4)3
+ H2SO4 = 2CuSO4
+ 2FeSO4 + H2O
10FeSO4
+ 2KMnO4 + 7H2SO4 = 5Fe2(SO4)3
+ 2MnSO4 + 8H2O
Оборудование
и реактивы: Растительный материал для анализа: яблоко
или свекла; весы с разновесами; ступка с пестиком; лопаточка или скальпель;
бюретки для титрования; колба мерная на 100 мл; пипетка на 10 мл; конические
колбы на 50 органический растворитель 100 мл; воронка; бумажные фильтры; стеклянные фильтры; песок
или толченое стекло; соляная кислота (5%); раствор CuSO4
(4%), смесь глицерина с NaOH, 0,1 н раствор KMnO4,
раствор Na2C2O4
(0,2%), раствор Fe2(SO4)3
(5%), раствор H2SO4 (50%)
Ход
работы: Берут навеску 5 г сырого растительного материала, растирают
в ступке с 0,5 г толченого стекла до однородной массы. Растертую массу количественно
переносят в колбу на 50 мл, заливают 40 мл горячей воды органический растворитель нагревают в течение
20 мин на водяной бане при 80 градусах С. Через час колбу снимают с бани
и переносят ее содержимое в мерную колбу на 100 мл, ополаскивая несколько
раз колбу, в которой проводилась экстракция. Объем вытяжки доводят до метки
и фильтруют в другую колбу. В фильтрате определяют суммарное содержание
сахаров органический растворитель концентрацию редуцирующих сахаров. Для гидролиза сахарозы органический растворитель других
нередуцирующих сахаров 20 мл полученного фильтрата переливают в отдельную
колбу, добавляют 2 мл 5% раствора HCl органический растворитель помещают в кипящую водяную баню
на 30 мин. При этом сахароза распадается до редуцирующих моносахаридов -
фруктозы органический растворитель глюкозы. Берут 20 мл фильтрата органический растворитель 20 мл раствора, полученного
после гидролиза сахарозы, в термостойкие колбы на 100 мл, приливают в каждую
колбу по 20 мл раствора CuSO4 органический растворитель 20 мл смеси NaOH-глицерин,
осторожно смешивают их, слегка вращая колбу, органический растворитель кипятят точно 3 мин с момента
закипания. Полученному красному осадку дают отстояться 1-2 мин. Жидкость
из колб переносят в цетрифужные пробирки. Колбы промывают 5 мл горячей дистиллированной
воды, смывая осадок в центрифужные пробирки. Центрифугируют при 4-5 тыс.об.
в течение 3 мин. Затем надосадочную жидкость из обеих пробирок сливают,
а осадок в каждой пробирке дважды промывают 20 мл горячей дистиллированной
воды (после каждого раза - центрифугируют). Промытые осадки из каждой пробирки
переносят в термостойкие колбы на 100 мл с помощью 10-15 мл раствора Fe2(SO4)3
и растворяют при нагревании на водяной бани. Образовавшиеся растворы сразу
же титруют перманганатом калия до появления слабо-розового окрашивания,
сохраняющегося в течении 1 мин. Поскольку раствор KMnO4
неустойчив при хранении, необходимо определить его титр по оксалату натрия.
Для этого берут навеску оксалата натрия 200±0,1 мг, растворяют в 100 мл
горячей дистиллированной воды, прибавляют 10 мл 50% раствора H2SO4
и титруют раствором перманганата калия до появления слабо-розового окрашивания.
Титрование, особенно в начале, нужно вести очень медленно. Титрование считают
законченным, когда появившаяся розовая окраска не исчезает в течение 1 мин.
Титр раствора KMnO4 по оксалату натрия рассчитывают
по формуле:
Tоксалат (мг/мл)=94,3/ t
где
t - объем 0,1 н раствора KMnO4, израсходованный на
титрование оксалата натрия, мл Коэффициент 94,3 рассчитан на основе уравнения
реакции: 5Na2C2O4
+ 2KMnO4 + 8H2SO4
= 10CO2 + 5Na2SO4
+ 2MnSO4 + K2SO4
+ 8H2O Для дальнейших расчетов необходимо определить
титр раствора KMnO4 по меди:
Тмедь
= Токсалат * 4,019
Для
вычисления концентрации сахаров в растворе, взятом для анализа, объем раствора
перманганата калия, пошедший на титрование исследуемого раствора, умножают
на Tмедь, органический растворитель по номограмме находят, какому количеству сахаров он соответствует.
Содержание редуцирующих сахаров (%) в исходном материале определяют по формуле:
r
= а*V*100/ Vi*n
где
а - количество сахаров, определенное по номограмме, мг; V - объем вытяжки,
полученной из навески, мл, Vi - объем пробы вытяжки, взятой для определения,
мл; n - навеска материала, г. Суммарное содержание редуцирующих органический растворитель нередуцирующих
сахаров (в растворе, полученном после гидролиза с HCl, рассчитывают по формуле:
s= b*V*100/ Vi*n
где
b - количество сахаров во взятом объеме раствора, полученного после гидролиза
сахарозы, найденное по номограмме, мг; V, Vi, n - см. выше. Содержание нередуцирующих
сахаров, основную часть которых составляет, как правило, сахароза, рассчитывают
как разницу между s органический растворитель r.
ПЛАН
КОЛЛОКВИУМА №1 ПО ТЕМЕ "НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ"
1.
Типы нуклеиновых кислот (ДНК, все типы РНК).
2. Нуклеотиды органический растворитель азотистые основания. Химическая структура, образование комплементарных
связей.
3. Образование ковалентных связей, первичной структуры нуклеи-новых кислот.
4. Особенности строения разных типов двойной спирали.
5. Репликация ДНК.
6. Транскрипция, образование органический растворитель процессинг РНК.
7. Хранение генетической информации у прокариот органический растворитель эукариот
ПЛАН
КОЛЛОКВИУМА №2 ПО ТЕМЕ "БЕЛКИ И АМИНОКИСЛОТЫ"
1.
Протеиногенные аминокислоты, их классификация.
2. Первичная структура белка органический растворитель методы ее определения.
а) Сэнгера
б) Эдмана
3. Пептидные связи органический растворитель типы вторичной структуры белков.
4. Третичная органический растворитель четвертичная структуры белков. Связи, участвующие в образовании
и стабилизации этих структур.
5. Синтез белка
а) Рибосомальный цикл.
б) Инициация, элонгация органический растворитель терминация синтеза белка.
ПЛАН
КОЛЛОКВИУМА №3 ПО ТЕМЕ "ГЛИКОЛИЗ, ЦИКЛ КРЕБСА, ФЕРМЕНТЫ"
1.
Реакции гликолиза органический растворитель их стехиометрия.
2. Пути метаболизма ПВК.
3. Энергетический баланс гликолиза.
4. Цикл Кребса:
а) Стехиометрия.
б) Энергетика.
5. Глиоксилатный цикл.
6. Кинетика Михаэлиса-Ментен. Уравнение Михаэлиса-Ментен. Линеаризация уравнения
Михаэлиса-Ментен.
7. Типы ингибирования ферментов.
вебмастер
Michael.Yashkov@usu.ru
Лабораторные
работы:
№1. Исследование свободных аминокислот
растительного материала методом хроматографии на бумаге.
№2. Определение неорганического фосфора.
№3. Изучение свойств ферментов.
№4. Электрофорез аминокислот.
№5. Гель-хроматография. Разделение смеси крахмала органический растворитель глюкозы.
№6. Определение азота в растительном материале.
№7. Люминисцентный анализ витаминов В1
и В2.
№8. Определение аскорбиновой кислоты.
№9. Объемный метод определения крахмала.
№10. Определение редуцирующих органический растворитель нередуцирующих сахаров по
Бертрану.
Коллоквиумы:
№1. Нуклеиновые кислоты.
№2. Белки органический растворитель аминокислоты.
№3. Гликолиз. Цикл Кребса. Ферменты.
разделы
билет мхат
зубной камень
букмекерский контора шанс
mastercard
кофе колониальный товар
сдать анализ кровь
покраска рчв
кулер 754
время кострома
органический растворитель